我阶段:免疫

• 10只无病毒抗体小鼠将用客户的抗原免疫。在免疫期间，小鼠将被安置在隔离室内。我们对十只老鼠进行免疫，以增加产生免疫原性反应的机会
• 为了得到更好的抗体应答，所述抗原与佐剂等制备FCA（弗氏完全佐剂），用于初次免疫
• 这种乳剂含有热杀死的分枝杆菌，可以确保抗原缓慢地释放到动物的循环系统中
• 在辅助刺激动物的免疫系统中的细菌
• 额外增强或免疫接种所必需的高抗体水平
  使用FIA(弗氏不完全佐剂)
• 注射常见的途径是腹膜内，肌肉注射，静脉注射，皮下注射
• 对于杂交瘤的发展，s.q.通常使用。五到100微克抗原的用于每个免疫。我们要求客户为二，三毫克抗原
• 6周后，在初次免疫和第一升压以下，老鼠的抗体滴度进行测试。抗体将通过ELISA测定，除非客户有一种替代测定法来测定。
• 如果需要额外的刺激，它们将被给予和小鼠将重新测试抗体滴度
  一旦免疫完成后，将小鼠保持在融合之前三至4周
• 在融合前的3到5天，将挑选一只老鼠进行融合前的强化

第二阶段

1）融合

• 从小鼠脾脏将被收获和与骨髓瘤细胞系融合所有脾细胞。我们一般采用NS-1融合
• 一般6- 10个96井面板将被镀
• 细胞将在HAT(次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷)选择培养基中生长。这选择性地杀死细胞缺乏的酶(HGPRTase)，这是操作的补救途径，以制造核酸。骨髓瘤和脾脏细胞将会死亡
• 最多将进行三次单独的融合

2）屏幕，并选择

• 将96个孔板用ELISA进行抗体阳性孔的筛选
• 标准产物将用单一ELISA抗原进行筛选
• 作为一种选择，可以添加额外的ELISA抗原
• 约15从ELISA测定阳性孔将被选择扩大和冻结可能克隆
• 组织培养上清液（0.2毫升，每克隆）可被发送到客户用于进一步测试

第三阶段

1)第一个克隆

• 克隆将选择最多6个阳性孔
• 他们将通过有限稀释法进行克隆。在该方法中细胞稀释，使得它们可以被单独吸移到各孔中
• 分离菌落将通过ELISA进行检测，选择的阳性结果将用于下一轮克隆
• 10 -14天后就可以看到蜂群了
• 从这些阳性克隆细胞将被冻结备份

2)最终克隆

• 从第一周期克隆阳性克隆将被选择用于第二周期
• 分离的菌落将通过ELISA和选定的扩大阳性测试。克隆的几个周期可以获得真实的，稳定的克隆可能需要。从这些阳性克隆细胞将被冻结备份

3)选择或非ht要求

• 最多三个阳性克隆将被进一步选择用于克隆，生长在缺乏介质HT

4)冻结的股票

• 最后选中的三个克隆体将被扩大，每个克隆体的一小部分将被冷冻。每个克隆准备少量的组织培养上清(2 - 5ml)。每个克隆都是同型的

注：我们的服务允许最多发展到三年，五年或十年阳性克隆。