抗原选择和制备
抗原的最佳选择和制备对于获得高质量抗体至关重要在多克隆和单克隆抗体生产中。虽然抗原选择和准备的重要性并不立即对该领域的一些人显而易见，但Envigo的经验表明这是一个批判考虑因素。raybetAPP
第一步 - 选择抗原
该过程的第一步是选择感兴趣的抗原。需要考虑的特征包括免疫原性潜力;许多抗原不是高度免疫原性的。除了问题组织代表或者自我抗原，抗原型，源，纯度，3-D结构和抗体产物的预期最终用途也是重要的前导考虑因素。由于一些应用更适合多克隆而不是单克隆的生产，而不是单克隆的生产，因此第一个问题之一是：“您打算如何使用抗体？“
制备免疫抗原
选择合适的抗原后，下一步骤正在制备抗原免疫并且选择刺激的B细胞或抗体收集。因为对天然抗原的访问通常是有限的，所以重组蛋白表达通常用于产生足够的抗原。这个处理可以使用真核和/或原核表达系统。
使用真核表达时的考虑是对抗原的适当折叠和翻译后修饰的可能影响，这可能影响表位在发生抗原呈现时是否适当呈现。另一方面，翻译后修饰的存在对于呈现一些抗原的呈现不重要，例如3D结构不是问题的小抗原或肽。
除了重组蛋白外，合成肽可以用作抗原来源。他们上诉的一部分是他们易于获得，廉价才能产生并且可以用来生产针对不同蛋白质同种型或特异性磷酸化蛋白的抗体。由于大多数肽缺乏二级结构，重要的是要避免由于蛋白质的三级结构而可能不可用的表位因为所得抗体可能无法识别天然蛋白质。
另一种考虑是抗原是否自然被发现为孤独的分子或作为蛋白质的较大络合物的一部分。关于原生蛋白是否经历的变化和翻译后修饰等的见解，或者如何折叠可能是非常有帮助的;这些变化可能会影响现实世界环境中检测的表位的可用性。
增强免疫反应
为了增强动物的免疫应答并产生针对小肽的抗体，研究人员通常将肽耦合到载体蛋白质，如匙孔颗粒血糖（KLH），甲状蛋白酶（Tg），卵烧蛋白（OVA）或牛血清白蛋白（BSA）。这些蛋白质本身是免疫原性，导致针对载体的抗体产生，因此抗体筛选和表征是重要的。
制备合成肽或重组抗原的程序也可以是杂质的来源。例如，反应副产物，培养基组分和/或与其他肽的污染是可能的;这些杂质可以对免疫后免疫应答的巨大作用。还开发了使用标准肽 - 载体缀合物的替代方法。
全长（本机）蛋白抗原通常被认为是相对于其他抗原策略的优异选择，主要是在实证数据上，其表明它们倾向于在识别天然靶蛋白的引发抗体时更好地表现更好。在一项研究中，使用三种免疫方法：肽抗原，DNA免疫和全长蛋白，调查人员针对10个血清蛋白质的抗体引起抗体。该作者据报道，总体上，用全长蛋白质免疫始终产生最佳效果。
然而，在成功免疫所需的数量中获得全长蛋白通常是限制因素，因此在所有情况下都不合适。此外，获取足够量的全长抗原所需的方法可以引入杂质，例如洗涤剂，变性剂，溶剂或改变的pH条件，其可能影响动物的健康并导致较差的滴度抗血清或B细胞刺激。
考虑
一旦产生了适当的抗原以足够的量产生，必须优化其制备中的进一步步骤，以提供诱导有效和适当的免疫应答的最佳机会。特别是抗原的纯度对抗体产量产生显着影响;如果用于抗体生产过程的原料以其他方式被污染或劣等，例如细菌抗原的存在或不适当的缓冲液组合物（这会影响抗原的溶解度和结构），则最终产品处于增加风险表现不佳。
虽然获得高纯度的抗原可能是艰苦的过程，但实施最小化抗原污染的方案是最佳实践，有助于确保抗体特异性。免疫系统可以对杂质安装重大反应，其可以用误导的抗体或B细胞污染抗体制剂。
结论
增加出色的抗体的机会需要仔细规划最早的阶段，包括选择和制备抗原。这一前期投资将使抗体成功，节省时间，努力和金钱在长远来看。
根据您的抗体的最终应用，应该以敞开的思想开始，并考虑是否是一个多克隆抗体要么单克隆抗体是您申请的最佳拟合。
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