2017年6月23日

6多克隆抗体生产的简单秘诀

理查德哈里森

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仔细的规划和制备对于产生异常多克隆抗体(PAB)至关重要。多克隆抗体由B淋巴细胞的混合物产生具有不同表位接种的B淋巴细胞朝向相同的抗原产生。从开始完成后,PAB开发需要两到六个月,但定制时间表可能需要更多时间。
第一步是选择免疫抗原。如下一个博客制品中所讨论的那样,PAB不适用于一些应用,单克隆抗体(MAB)可能更合适。雷电竞下载苹果app雷竞技电竞官网

第一步是选择免疫抗原。PAB不适合某些应用程序单克隆抗体(mAbs)可能更合适,如下一个博客文章所述。雷电竞下载苹果app雷竞技电竞官网

选择动物

抗原选择和准备后,是时候选择合适的动物物种了。兔子通常是PAB开发的首选因其尺寸,寿命长,易于处理和生产高滴度,高亲和力抗体的能力。

动物饮食,住房环境,压力水平和其他抗原的存在动物的环境也影响多克隆抗体生产。例如,兔子很容易被安置在受控实验室,研究人员可以通过将兔子的储备在具有严格的屏障环境中储存兔子来获得优质的PAB产量。前者减少与单个笼式外壳相关的应力水平,并允许更多的自然行为模式,这反过来导致更好的免疫应答和最佳的多克隆抗体产生。反过来,严格的屏障环境可以最小化兔子中不需要的抗体水平,并可能导致较低的后免疫球蛋白水平。

使用佐剂来提高结果

佐剂为免疫系统提供免疫刺激信号,促进免疫反应。仍可使用具有低免疫原性的抗原如果用佐剂给药,则产生PAB。此外,佐剂能够赋予较小剂量的抗原。

多克隆抗体生产中使用的常见佐剂配方的一些实例是:弗氏完整的佐剂弗氏不完整的佐剂和铝盐(明矾)。弗氏完整的佐剂广泛使用在多克隆抗体产生,由于其诱导抗血清高滴度对各种抗原的能力(HANCOCK等人,2005b)。它通常保留用于初始免疫,因为在该佐剂中存在的灭活的分枝杆菌可以在重复施用后引起组织坏死。

抗原辅助混合物的仔细无菌制备是必不可少的,以避免引入污染微生物并保持抗原的稳定性。如果抗原辅助混合物质量差,则动物存在疾病的风险,并且抗体可能具有较低的滴度和功能。

免疫协议

用于提供抗原的途径取决于许多因素包括动物物种,佐剂的具体特征和抗原的组成和体积。在兔子中,最常见的免疫协议是在背面进行多次皮下注射(SC)。该方法允许视觉监测潜在的炎症反应。在免疫之后,每天应监测动物,这往往涉及注射部位的触诊,以监测潜在的病理病变的发展,以及对一般健康的临床观察。还应监测实际的抗体反应。

初级和升压注射后七至十四天,通常进行试验出血。此时使用与抗体的预期用途产生的测定法测量特异性抗体的水平。

抗体收藏

在观察到对免疫的适当反应后,可以收集血清。不同种类的动物具有独特的允许循环血容量百分比。随着时间的推移,生产出血的产量出血。在质量保证测试之前,收集堆积抗血清和离心去除细胞碎片。

多克隆抗体纯化

剩下的细胞碎片,微生物和非特异性免疫球蛋白可以影响抗体性能。结果,研究人员净化了PAB至关重要。调查人员应仔细考虑哪种纯化技术是最合适的。使用亲和层析纯化大多数PAB,其依赖于在色谱基质中固定的蛋白质A或蛋白质g。(Grodzki等。,2010;Roque等人。,2007)。

虽然蛋白质A / g可以增加PAB的纯度,当在某些测定中使用时,一些PAB可能仍可能遭受高水平的背景Grodzki等。,2010)。在这些情况下,抗原亲和力纯化应单独或与蛋白A / g一起进行。

最近已经开发了树脂,其将纯化几种IgM和IgA抗体分子。这也通过除去蛋白酶等污染物来增强抗体稳定性。(Grodzki等。,2010;Roque等人。,2007)。

用于研究,诊断和临床发展中的试剂的PAB生产包括许多不同和重要的步骤。通过仔细考虑诸如动物物种,佐剂,注射方案和抗体收集和净化方法的变量,研究人员可以开发出高质量的PAB。

多克隆抗体生产中的考虑

全面的,需要仔细的规划和准备来生产特殊的多克隆抗体用作研究,诊断和临床发展中的试剂。通常选择PAB用于各种应用,其中它们识别给定抗原上的多个表位的能力是有利的。阅读更多在我们白皮书中:在抗体作为试剂的抗体的考虑:多克隆抗体

[白皮书]了解更多关于生产多克隆抗体作为试剂的生产

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